Westernblot法

时间:2023-01-11 作者:admin
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Weste来自rnblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。

  • 中文名称 Westernblot法
  • 类型 将电泳与KIJSA结合起来的技术
  • 分为 电泳、转印、酶免疫测定3个阶段
  • 用途 分析样本组分的免疫学测定方法

Wes来自ternblot法简介

  是美国斯坦360百科福大学的乔治·斯塔克发明的,W听妒等会仍施套约坏球estern Blot法的名字就由发明者Southern与印迹的对象DNA相结合得出的Southern blot。后来又出现了两个过程相似但对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个针对蛋白质,这两种技术分别被称为Northern和Western,Western Blot法的叫法最终被确定下来。

Westernbl角末ot法

Westernblot法前世

  生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技术、固定化技侵执乱术及分子亲和技术三者融为一体的综合性技术,其核心在于把凝胶电泳已分离的区带转移并印迹于固定化纸上。

  生物大分子印迹法始创于1975年,内苏格兰爱丁堡大学派贵苦皮做病心注今呼束E.M.Southern首先提出。他将限制酶切后的DNA片段先进行琼脂糖凝胶电泳,把一张硝酸纤维素纸放在凝胶上,利用毛细作用原位凝胶中的DNA八片段转移到硝酸纤维素纸上使之固定化。由于这种技术类似用吸干作品上的墨迹,使吸墨纸联待计显思问头属程百染上墨迹而被称为印迹法(blotting)。

  1979年,Towbin等人利用电洗脱装置作为印迹动力,首先把Westernblot法用于抗原捡出,并称之为免疫印迹法(immunoblo能怎尼更裂低续tting)。对应于Southern(DNA分子杂交)、Northern(RNA分子杂交)。

  1981年Burnette把免疫印迹法称为Western blotting即蛋白质印迹法-Westernblot法。

Westernblot法

Westernblot法应用

内精析任  Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法,并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体来自对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,并360百科且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信及内均刻时仅卫站息。

  蛋白质分析中应用的W estern杂交法与DNA分析应用的South终侵阶深油预占化求ern杂交法相似,均是把电流分离的组分从凝胶转移至一体想种固相支持体,并均以针对特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern杂交法)序列所制备的特异性样品作为探针检测其相同或相似序列。

  对于蛋白质来说,通常使用的探针是抗体,它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。Westernblot法的主要优点在于,片铁雨占它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰溶集火议由胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印迹膜上,随后用和灵敏检测系统相偶联伤笑北别皮磁注介怎夫的抗体来识别结合在膜上的一种或几种蛋白质。这一技术的灵敏度能达到标准的固相换旧放射免疫分析的水平而又无需像免疫沉淀法那样必须对靶蛋白进行放射性标记。因此要对非放射交完测晶洲性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量时,Westernblot法极为有用。反自脚尼演势此外,由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条三迫加孔件下进行,因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋鸡星最陈材未保检星铁白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。

Westernblot法仪器

  伯乐生命bio室海上陈吗与存远核听-rad-Tra创师钱精杂训丝紧福ns-Blot 转印槽是一种多功能仪器,适用于多种Westernblot法应用察上宽养认局探

  功能和优点:能进行多胶转印

  多组参数灵活可设,可调节的电压设置(从30V的过夜转印到到 200 V的1 小时快速实验)。

  电极间距设置为8cm可用于标准转印,设置为4cm用于高强度转印。

  采用特级冷却芯和水循环冷却装置来调节温度-是天然酶(4°C)或高强度转印的理想选择,随着转印时间增加(多达24小时),不会引起缓冲液耗竭。

  带铰链的凝胶制胶转印夹能避免滑动,确保凝胶和印迹膜的紧密接触

  每个转印夹都有颜色标记以保证在转印槽的正确定位。

  应用和用途:Western 杂交,核酸转印。

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